__________________________________________________________________________________ MORPHOLOGIA • 2021 • Том 15 • № 3 76 Г.И. Губина-Вакулик С.А. Денисенко Т.В. Горбач Е.М. Зоренко В.С. Гойдина Харьковский национальный медицинский университет, Харьков, Украина Надійшла: 14.08.2021 Прийнята: 20.09.2021 DOI: https://doi.org/10.26641/1997-9665.2021.3.76-83 УДК 616.45-091:616.894-053.9-092.9:546.33'173 МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СО- СТОЯНИЕ МОЗГОВОГО ВЕЩЕСТВА И ПУЧКОВОЙ ЗОНЫ НАДПОЧЕЧНИКОВ ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА ИЗБЫТОЧНЫМ ВВЕ- ДЕНИЕМ НИТРИТА НАТРИЯ Gubina-Vakulyck G.I. , Denysenko S.A. , Gorbach T.V. , Zorenko Ye.M. , Goydina V.S. Morpho- functional state of the medulla and the fascicular zone of the adrenal cortex in modeling Alzheimer's disease by exces- sive administration of sodium nitrite. Kharkiv National Medical University, Kharkiv, Ukraine. ABSTRACT. Background. Nitrates and nitrites are found in soil, water, human food, dyes, and medicines. In the literature, both positive and negative effects from the ingestion of nitrates and nitrites into the body are considered. A nitrite model of Alzheimer's type dementia of vascular origin was used in the work. Objective. The aim of the study was to study the mor- phofunctional state of the adrenal glands of experimental animals with prolonged administration of sodium nitrite. The study was carried out on male rats of the WAG population, which were divided into 3 groups: gr. N-14 - received injections of a water solution of sodium nitrite at a dose of 50 mg / kg of body weight daily for 14 days; gr. N-28 - Rats received similar injections for 28 days. Injections are intraperitoneal. Control rats were injected with 0.9% sodium chloride solution. Results. In animals of the main groups, the formation of a morphofunctional picture of the development of a stress reaction takes place, which was also confirmed morphometrically, and in group N-28 - with signs of incipient decompensation of the me- dulla and the fascicular zone of the adrenal cortex. Conclusion. When simulating Alzheimer's disease in laboratory rats by the introduction of a water solution of sodium nitrite at a dose of 50 mg / kg of body weight by daily intraperitoneal injection for 14 and 28 days, a picture of their morphofunctional activation is formed in the medulla and fascicular zone of the adrenal cortex. In the group with a 28-day course of administration of sodium nitrite solution, morphofunctional signs of decompen- sation of the medulla and the fascicular zone of the adrenal glands (especially the medulla) appear, which indicates the devel- opment of severe distress in animals and the impossibility of restoring homeostasis. Key words: Alzheimer's disease, sodium nitrite, adrenal glands, rats. Citation: Gubina-Vakulyck GI, Denysenko SA, Gorbach TV, Zorenko YeM, Goydina VS. [Morphofunctional state of the medulla and the fascicular zone of the adrenal cortex in modeling Alzheimer's disease by excessive administration of sodium nitrite]. Morphologia. 2021;15(3):76-83. Russian. DOI: https://doi.org/10.26641/1997-9665.2021.3.76-83 Gubina-Vakulyck G.I. 0000-0003-3816-8530; Denysenko S.A. 0000-0002-8457-4436 Gorbach T.V. 0000-0003-4819-7220; Zorenko Ye.M. 0000-0001-9354-9438 Goydina V.S. 0000-0002-7062-2003  Svet.Deni@ukr.net © Dnipro State Medical University, «Morphologia» Введение Нитраты и нитриты присутствуют в почве, воде и продуктах питания человека. Как нитра- ты, так и нитриты широко используются при производстве и консервировании мясных изде- лий и некоторых рыбных продуктов. Во многих странах это регламентируется законодательством и является чрезвычайно важным для предотвра- щения ботулизма. Наибольшее количество нит- ратов накапливается в продуктах растительного происхождения, таких как листовые овощи, са- латы, свекла. Нитраты хорошо растворимы в во- де и имеют 100% биодоступность. Нитраты пре- вращаются в нитриты комменсальными бактери- ями во рту и желудочно-кишечном тракте. В ли- тературе рассматриваются как положительные, так и отрицательные эффекты присутствия нит- ратов и нитритов в рационе питания. И нитрит, и __________________________________________________________________________________ MORPHOLOGIA • 2021 • Том 15 • № 3 77 нитрат могут эндогенно превращаться в оксид азота (NO). NO является фундаментальным мо- дулятором функции эндотелия, ведет к вазодиля- тации и снижению АД. Уровни циркулирующего NO повышаются после приема нитратов и нит- ритов либо в виде медикаментозных препаратов, либо в виде пищевых добавок [1]. По мнению авторов [2], нитраты и нитриты можно рассмат- ривать как пулы хранения, поддерживающие передачу сигналов NO во время метаболического стресса, с их биоактивацией, включающей как ферментативные, так и неферментативные реак- ции в крови и тканях организма. В эксперимен- тальных работах показано, что потребление не- органических нитратов значительно снижает артериальное давление [3,4]. Введение нитратов или нитритов на экспериментальных моделях сердечно-сосудистых заболеваний дает много- обещающие результаты, и в настоящее время продолжаются клинические испытания для изу- чения терапевтического потенциала нитратов и нитритов при артериальной гипертензии, легоч- ной гипертензии, заболеваниях периферических артерий и инфаркте миокарда. В работе, выпол- ненной на физиологическом уровне, показано, что добавление нитратов в рацион улучшает в спорте результаты на выносливость. [5] Кроме того, было выяснено, что образую- щийся из нитритов NO в митохондриях связыва- ется с цитохромоксидазой, при этом повышается взаимодействие кислорода с недыхательными субстратами, и происходит генерация активных форм кислорода (АФК) с потенциально повре- ждающими эффектами [2]. Примерами развива- ющихся отрицательных последствий при приеме нитритов могут быть следующие: в эксперимен- тальной работе [6] было показано, что крысы, в течение 4 недель получавшие дистиллированную воду, содержащую 50 мг/л NaNO2 или NaNO3, стали пить значительно меньше, наблюдалось снижение уровней кортикостерона и тестостеро- на в крови. Гистологическое исследование надпочечников показало наличие более крупных липидных капель в цитоплазме спонгиоцитов, что является патогномическим признаком сни- жения стероидогенеза. В работе других авторов [7] у лабораторных крыс при употреблении 0,08 мг/кг нитрита натрия в течение 28 дней наблю- дали значительное снижение количества, по- движности и жизнеспособности сперматозоидов, по сравнению с контрольной группой. Также было показано, что однократная нагрузка нитри- тами (60 мг/кг массы тела внутрибрюшинно) вызывает гепаторенальную дисфункцию [8]. Таким образом, очевидно, что чрезмерное и продолжительное введение нитратов и нитритов в организм может привести к развитию патоло- гического состояния. В Харьковском националь- ном медицинском университете разработана нитритная модель развития болезни Альцгейме- ра (БА) с накоплением амилоида в белом веще- стве и стенке артерий головного мозга [9], ос- новным начальным звеном которой является по- вреждение эндотелия кровеносных сосудов, в т.ч. капилляров, активными формами кислорода. Если рассматривать эту ситуацию с модели- рованием БА как развивающуюся патологию головного мозга с клиническими, биохимиче- скими и морфологическими признаками и посте- пенным нарушением гомеостаза, то в ответ на это происходит организация адаптационных процессов, обязательным участником которых является надпочечник (НП). В нашем распоря- жении оказались НП животных, у которых путем введения раствора нитрита натрия была получе- на модель БА. Цель исследования - изучить морфофунк- циональное состояние надпочечников экспери- ментальных животных при длительном введении нитрита натрия. Материал и методы Исследование проведено на крысах-самцах популяции WAG массой 180–230 г, которые бы- ли разделены на 3 группы: гр. N-14 – внутри- брюшинно вводили водный раствор нитрита натрия в дозе 50 мг/кг массы тела в течение 14 дней (8 животных); гр. N-28 - внутрибрюшинно вводили водный раствор нитрита натрия в анало- гичной дозе в течение 28 дней (8 животных). Контрольным крысам (n=16) вводили 0,9% рас- твор натрия хлорида таким же путем и в те же сроки (гр. К). Животные всех исследуемых групп содержались в стандартных условиях вивария на сбалансированном рационе. Изучение морфофункционального состоя- ния надпочечников проводилось согласно стан- дартной методике: фиксирование в формалине, спиртовая проводка, заливка в парафин и изго- товление срезов. Использовалась окраска срезов гематоксилином-эозином и галлоцианин- хромовыми квасцами по Эйнарсону на суммар- ные нуклеиновые кислоты. Кроме общего анали- за и описания гистологических особенностей (микроскоп «Axiostar-plus» Zeiss, ФРГ), осу- ществлено морфометрическое исследование (Видео Тест, РФ) мозгового вещества (МВ), про- дуцирующего стрессорганизующие гормоны - адреналин и норадреналин, и пучковой зоны ко- ры надпочечников, продуцирующей стресслими- тирующий гормон кортикостерон [10]. Измерены площадь ядер нейроэндокриноцитов мозгового вещества и спонгиоцитов пучковой зоны НП, их количество на площади 500 мкм2 микропрепара- та, оптическая плотность цитоплазмы этих кле- ток на препаратах, окрашенных галлоцианин- хромовыми квасцами на нуклеиновые кислоты (показатель содержания РНК). Количественные показатели обработаны с использованием метода вариационной статистики и t критерия Стьюден- та после доказательства нормального распреде- __________________________________________________________________________________ MORPHOLOGIA • 2021 • Том 15 • № 3 78 ления значений показателей. Эксперимент проведен в соответствии с требованиями Страсбургской конвенции (1986г.) и VIII Директивы Европейского парламента (2010г.). Результаты и их обсуждение МВ интактных животных (гр.К) многокле- точно, хорошо васкуляризовано. Среди нейроэн- докриноцитов доминируют клетки с темными небольшими ядрами и эозинофильной, т.е. не вакуолизированной цитоплазмой, скорее всего, это нейроэндокриноциты, находящиеся в покое, т.к. в их цитоплазме отсутствуют запасы катехо- ламинов. Меньшая часть нейроэндокриноцитов имеют вакуолизированную цитоплазму; что, как известно, демонстрирует формирование запасов катехоламинов (рис. 1). Данные о средней пло- щади ядер нейроэндокриноцитов, об оптической плотности цитоплазмы при окрасе на суммарные нуклеиновые кислоты и о количестве нейроэндо- криноцитов на фиксированной площади микро- препарата представлены в таблице 1. Таблица 1 Морфометрические показатели эндокриноцитов мозгового вещества и пучковой зоны надпочечников Исследуемые области Группы Количество эндокри- ноцитов в поле зрения на площади 500 мкм2 Размеры ядер эндо- криноцитов, (М±m, мкм2). Оптическая плотность цитоплазмы при окраске по Эйнарсону (усл.ед.опт.пл.) Пучковая зона коры гр.К 4,5±0,2 19,7±0,6 0,088±0,006 гр. N-14 5,9*±0,2 19,5±0,5 0,116*±0,008 гр. N-28 6,0*±0,3 20,4±0,4 0,143*±0,011 Мозговое веще- ство гр.К 7,7±0,3 16,9±0,9 0,270±0,015 гр. N-14 6,6*±0,3 28,4*±0,5 0,172*±0,012 гр. N-28 6,1*±0,2 26,3*±0,4 0,102*±0,012 *- достоверность р˂0,05 относительно контрольной группы. В группе N-14 МВ на микропрепарате вы- глядит также в виде компактного пласта нейро- эндокриноцитов. Однако их ядра заметно круп- нее и светлее, как при окраске гематоксилином- эозином, так и по Эйнарсону. Цитоплазма более объемная, чем в гр. К, и очень мелко вакуолизи- рована, т.е. можно предполагать, что в течение курса инъекций нитрита натрия (1 раз в сутки) мозговое вещество НП реагировало выбросом в кровь и синтезом индоламинов, создавая некото- рый запас гормонов в виде прозрачных вакуолей. Нейроэндокриноцитов с крупными прозрачными вакуолями нет. Единичные нейроэндокриноциты имеют мелкое гиперхромное (пикнотичное) яд- ро, возможно находятся в состоянии апоптоза. О повышенной морфофункциональной активности МВ НП в группе N-14 свидетельствуют также морфометрические данные (табл.) об увеличении средней площади ядра нейроэндокриноцитов и увеличении размеров нейроэндокриноцитов (т.к. на фиксированной площади микропрепарата размещается достоверно меньшее количество нейроэндокриноцитов). Достоверное уменьше- ние средней оптической плотности цитоплазмы нейроэндокриноцитов при использовании окрас- ки по Эйнарсону (это показатель понижения со- держания РНК в цитоплазме), на первый взгляд, не сочетается с результатом кариометрии. Одна- ко объяснение этому кажущемуся противоречию есть: причина понижения содержания РНК в ци- топлазме – это наличие многочисленных мелких прозрачных вакуолей с запасом катехоламинов. Таким образом, сравнивая морфологические, в т.ч. морфометрические, особенности мозгового вещества НП животных гр. N-14 с гр. К, можно говорить о повышении морфофункциональной активности МВ с созданием запасов катехолами- нов. У животных гр. N-28 МВ имеет вид трабе- кул, а не сплошного пласта, т.е. нейроэндокри- ноциты располагаются более рыхло, поэтому на ограниченной площади микропрепарата распола- гается еще меньшее количество нейроэндокри- ноцитов, чем в гр. N-14, средний размер ядер нейроэндокриноцитов – меньше, чем в гр. N-14 (но больше, чем в гр. К) (табл.). Заметная часть нейроэндокриноцитов имеет маленькое, темное пикнотичное ядро, что свойственно апоптозным клеткам (рис. 1). У большинства нейроэндокри- ноцитов отмечается мало выраженная вакуоли- зация цитоплазмы, однако оптическая плотность цитоплазмы при окраске микропрепаратов по Эйнарсону - низкая, т.е. имеет место понижение содержания РНК в цитоплазме нейроэндокрино- цитов. Очевидно, что курс из 28 инъекций нит- рита натрия обусловил развитие вначале такого высокого морфофункционального состояния МВ НП, что к концу эксперимента появились при- знаки нарастающего апоптоза, атрофии и посте- пенного понижения морфофункционального со- стояния нейроэндокриноцитов (дистрофизация). Пучковая зона у животных в гр. К имеет хо- рошо выраженные параллельные трабекулы. Яд- ра спонгиоцитов скорее темные, гетерохромные, __________________________________________________________________________________ MORPHOLOGIA • 2021 • Том 15 • № 3 79 только в отдельных ядрах можно увидеть конту- ры ядрышка. Цитоплазма пенистая, но фокально несколько спонгиоцитов имеют крупные про- зрачные вакуоли, что характерно для невысокой морфофункциональной активности спонгиоци- тов и формирования запасов исходного метабо- лита – холестерола. Морфометрические показа- тели пучковой зоны гр. К представлены в табли- це. Камбиальный слой, который «поставляет» эндокриноциты в пучковую зону, - широкий, в несколько рядов клеток (рис. 1). Рис. 1. Результаты микроскопического исследования МВ (A,C,E) и пучковой зоны НП (B,D,F); A – МВ животного Кгр.; C – МВ животного гр.N 14: ядра более крупные и более светлые; E – МВ животного гр.N 28: появляются нейроэн- докриноциты с крупными светлыми ядрами, с темными мелкими ядрами и маргинацией хроматина (↑); B – кора НП жи- вотного Кгр., широкая, многоклеточная камбиальная зона (↑); D – пучковая зона животного гр.N 14: много спонгиоцитов со светлым, мелкодисперсным хроматином в ядрах, липидные включения в цитоплазме не доминируют; F – пучковая зона НП животного гр.N 28: наличие участков цитолиза (↑), много спонгиоцитов с мелкими, гиперхромными ядрами. Окраска A,B,C,E,F - галлоцианин-хромовыми квасцами по Эйнарсону; D - гематоксилином-эозином. ×400. В гр. N-14 четкое трабекулярное строение пучковой зоны нарушено появлением небольших фокусов некроза (или апоптоза нескольких спон- гиоцитов). Многие спонгиоциты имеют крупные ядра с мелкодисперсным хроматином. Цито- плазма вакуолизована, вакуоли очень мелкие, в __________________________________________________________________________________ MORPHOLOGIA • 2021 • Том 15 • № 3 80 заметном количестве спонгиоцитов вакуоли от- сутствуют. Довольно часто встречаются спон- гиоциты с мелкими гиперхромными, пикнотич- ными ядрами. Средняя площадь ядер спонгиоци- тов (табл.) в гр. N-14 не имеет достоверного от- личия от таковой в гр. К, возможно, в связи с выраженной «пикнотизацией» ядер большого количества ранее гиперактивных спонгиоцитов. Оптическая плотность цитоплазмы спонгиоцитов в среднем достоверно выше, чем в гр. К, т.е со- держание РНК повышено. На площади микро- препарата площадью 500мкм2 «умещается» большее количество спонгиоцитов, чем в гр. К, следовательно, спонгиоциты имеют меньший размер, а это в данной ситуации возможно при уменьшении площади цитоплазмы, что имеет место в связи с уменьшением запасов исходного субстрата (поскольку сразу идет синтез гормона и его инкреция в кровь). Очень интересно, что камбиальный слой выглядит тонким, толщиной в одну-две клетки, т.е. в течение курса инъекций (14 инъекций) нитрита натрия камбиальный слой интенсивно пополнял пучковую зону молодыми эндокриноцитами. В целом у животных гр. N-14 имеется картина активации пучковой зоны коры надпочечников с необходимостью интенсивного обновления клеточного пула. У животных гр. N-28 наблюдаются еще бо- лее выраженные очаги лизиса спонгиоцитов с формированием рыхлого расположения трабе- кул. Среди спонгиоцитов встречаются полипло- идные и двуядерные, много спонгиоцитов с пик- нотичным ядрами и маргинацией хроматина в ядрах (апоптоз), а прозрачные вакуоли в цито- плазме – мелкие (рис. 1). Из морфометрических показателей особо значимым является еще большее по сравнению с гр. К и гр. N-14 увели- чение оптической плотности цитоплазмы при окраске по Эйнарсону, что свидетельствует о повышении содержания РНК в цитоплазме спон- гиоцитов (табл.). Камбиальный слой очень тон- кий, в одну клетку и прерывистый. В целом со- стояние пучковой зоны НП в гр. N-28 можно оценить, как гиперактивное, на грани декомпен- сации. Выявленные особенности МВ и пучковой зоны НП при 14-тидневном и 28-мидневном кур- сах нитрита натрия имеет смысл рассмотреть параллельно с ранее изученными поведенчески- ми и метаболическими особенностями тех же экспериментальных животных. У них было вы- явлено снижение двигательной активности, по- вышение эмоциональной реактивности, ухудше- ние исследовательской функции (в тесте «От- крытое поле»), причем в гр.N-14 эти изменения были минимальными, а в гр. N-28 - очень выра- женными [9,11]. Внешний вид крыс гр.N-14 мало отличался от внешнего вида контрольных животных, тогда как крысы гр.N-28 имели шерсть – неопрятную, «дыбом», без естественного блеска, глаза – «остекленевшие» с багровым оттенком, ротовая и носовая область лицевой части головы, кож- ный покров дистальных отделов конечностей и хвоста – с цианотичным оттенком. Такие крысы находились, в основном, в «застывшей», «вялой» позе, не взаимодействовали между собой, наблюдались случаи членовредительства [12]. Следует отметить, что в гр. N-28 в гомоге- натах мозга наблюдался самый высокий уровень содержания 2,3-дифосфоглицерата, который по- вышается при выраженной гипоксии тканей, и самый низкий уровень содержания основного фосфолипида внутренней мембраны митохон- дрий - кардиолипина, что способствовало нару- шению окислительного фосфорилирования и снижению синтеза АТФ. Данное состояние спо- собствовало нарушению синаптической пла- стичности в нейронах, что, предположительно, и влекло за собой развитие заторможенных реак- ций, выраженного дистресса у крыс гр. N-28 с последующей высокой вероятностью их гибели. В гр. N-14 также наблюдались сдвиги в энерге- тическом и прооксидантно-антиоксидантном балансе, однако они были незначительными и частично компенсировались, что сопровожда- лось легкой степенью дистресса и легкими нарушениями поведенческих реакций и когни- тивных функций [13,14]. Итак, у экспериментальных животных наблюдаем развитие патологического состояния (нитритная модель БА), и МВ и пучковая зона НП показывают морфофункциональную картину развития стрессовой реакции. Мозговое веще- ство НП, продуцирующее стрессорганизующие гормоны адреналин и норадреналин, имеет при- знаки морфофункциональной активации нейро- энокриноцитов в обеих основных группах и де- компенсации мозгового вещества при введении раствора нитрита натрия в течение 28 дней. У взрослых животных, как известно, мозговое ве- щество НП не имеет камбиальных клеток, и про- должительная активация мозгового вещества ведет к его атрофизации. Пучковая зона коры НП, продуцирующая стресслимитирующий гор- мон кортикостерон, морфофункционально нахо- дится в аналогичном состоянии, но поскольку спонгиоциты имеют эпителиальное происхожде- ние, возможна как внутриклеточная, так и кле- точная регенерация; в гр. N-28 камбиальный слой коры НП истончен, но еще не исчерпан. Можно назвать такое морфофункциональное состояние пучковой зоны коры НП на грани де- компенсации. Очевидно, что развитие патологи- ческого состояния (нитритная модель БА) и раз- рушение гомеостаза «включает» многочислен- ные звенья его восстановления, в т.ч. МВ и пуч- ковую зону НП, продуцирующих катехоламины и кортикостероиды, т.е. развивается эндогенный стресс. 14-дневный курс нитрита натрия вызвал __________________________________________________________________________________ MORPHOLOGIA • 2021 • Том 15 • № 3 81 состояние эустресса или начального этапа дис- тресса, а 28-дневный курс – тяжелого дистресса, с очевидным близким летальным исходом экспе- риментальных животных. В клинике стресс, в т.ч. эмоциональный стресс, считается фактором риска серьезности и прогрессирования болезни Альцгеймера [9]. По- лученные в настоящем исследовании результаты объясняют эту клиническую особенность боль- ных людей с болезнью Альцгеймера. Человек в состоянии хронического стресса имеет соответ- ствующие гиперактивные мозговое вещество и пучковую зону надпочечников, поэтому при раз- витии болезни Альцгеймера быстро развивается недостаточность этих компонентов надпочечни- ков, восстановление гомеостаза становится не- возможным и пациент умирает. Выводы 1. При моделировании болезни Альцгей- мера у лабораторных крыс введением водного раствора нитрита натрия в дозе 50 мг/кг массы тела ежесуточной внутрибрюшинной инъекцией в течение 14 и 28 дней в мозговом веществе и пучковой зоне коры надпочечников формируется картина их морфофункциональной активации. 2. В группе с 28-дневным курсом введения раствора нитрита натрия появляются морфо- функциональные признаки декомпенсации МВ и пучковой зоны НП, (особенно выраженно - МВ), что свидетельствует о развитии у животных тя- желого дистресса и невозможности восстановле- ния гомеостаза. Перспективы дальнейших разработок В перспективе планируется изучить морфо- функциональные особенности клубочковой и сетчатой зон НП, а также сопроводить биохими- ческим исследованием уровня соответствующих гормонов. Источники финансирования Работа выполнена в рамках научно- исследовательской темы «Патогенез поврежда- ющего действия на организм экзогенных факто- ров в современных условиях» (номер государ- ственной регистрации 0115U000991). Информация о конфликте интересов Потенциальных или явных конфликтов инте- ресов, связанных с этой рукописью, на момент публикации не существует и не предвидится. Литературные источники References 1. Briskey D, Tucker PS, Johnson DW, Coombes JS. Microbiota and the nitrogen cycle: Implications in the development and progression of CVD and CKD. Nitric Oxide. 2016;57:64-70. DOI: 10.1016/j.niox.2016.05.002. Epub 2016 May 7. PMID: 27164294. 2. Lundberg JO, Gladwin MT, Ahluwalia A, Benjamin N, Bryan NS, Butler A, Cabrales P, Fago A, Feelisch M, Ford PC, Freeman BA, Frenneaux M, Friedman J, Kelm M, Kevil CG, Kim-Shapiro DB, Kozlov AV, Lancaster JR Jr, Lefer DJ, McColl K, McCurry K, Patel RP, Petersson J, Rassaf T, Reutov VP, Richter-Addo GB, Schechter A, Shiva S, Tsuchiya K, van Faassen EE, Webb AJ, Zucker- braun BS, Zweier JL, Weitzberg E. Nitrate and ni- trite in biology, nutrition and therapeutics. Nat Chem Biol. 2009;5(12):865-869. DOI: 10.1038/nchembio.260. PMID: 19915529; PMCID: PMC4038383. 3. Jackson JK, Patterson AJ, MacDonald-Wicks LK, Oldmeadow C, McEvoy MA. The role of inor- ganic nitrate and nitrite in cardiovascular disease risk factors: a systematic review and meta-analysis of human evidence. Nutr Rev. 2018;76(5):348-371. DOI: 10.1093/nutrit/nuy005. PMID: 29506204. 4. Omar SA, Webb AJ, Lundberg JO, Weitzberg E. Therapeutic effects of inorganic nitrate and nitrite in cardiovascular and metabolic diseases. J Intern Med. 2016;279(4):315-336. DOI: 10.1111/joim.12441. Epub 2015 Nov 2. PMID: 26522443. 5. Gao C, Gupta S, Adli T, Hou W, Coolsaet R, Hayes A, Kim K, Pandey A, Gordon J, Chahil G, Belley-Cote EP, Whitlock RP. The effects of dietary nitrate supplementation on endurance exercise per- formance and cardiorespiratory measures in healthy adults: a systematic review and meta-analysis. J Int Soc Sports Nutr. 2021;18(1):55. DOI: 10.1186/s12970-021-00450-4. PMID: 34243756; PMCID: PMC8268374. 6. Panesar NS, Chan KW. Decreased steroid hormone synthesis from inorganic nitrite and nitrate: studies in vitro and in vivo. Toxicol Appl Pharma- col. 2000;169(3):222-230. DOI: 10.1006/taap.2000.9079. PMID: 11133344. 7. Adelakun SA, Ukwenya VO, Ogunlade BS, Aniah AJ, Ibiayo GA. Nitrite-induced testicular tox- icity in rats: therapeutic potential of walnut oil. JBRA Assist Reprod. 2019;23(1):15-23. DOI: 10.5935/1518-0557.20180062. PMID: 30106544; PMCID: PMC6364280. 8. Soliman MM, Aldhahrani A, Elshazly SA, Shukry M, Abouzed TK. Borate Ameliorates Sodi- um Nitrite-Induced Oxidative Stress Through Regu- lation of Oxidant/Antioxidant Status: Involvement of the Nrf2/HO-1 and NF-κB Pathways. Biol Trace Elem Res. 2021; DOI: 10.1007/s12011-021-02613- 5. Epub ahead of print. PMID: 33559025. 9. Nikolayeva OV, Pavlova OO, Lukyanova YM, Gubina-Vakulik GI, Gorbach TV, inventors; Kharkiv national medical university, assignee. Method for modeling Alzheimer's dementia of vas- __________________________________________________________________________________ MORPHOLOGIA • 2021 • Том 15 • № 3 82 cular origin in rats. Ukrainian patent UA 141759. 2020 Apr 27. Int. Cl. G09B 23/28. Ukrainian. 10. Pshennykova MG. [The phenomenon of stress. Emotional stress and its role in pathology]. Pathological physiology and experimental therapy. 2001;4:28-40. Russian. 11. Luk’yanova YM. [Changes in cognitive functions in rats with dementia of Alzheimer's type of vascular origin on the background of the introduc- tion of stem cells]. In: [Mechanisms of development of pathological processes and diseases and their pharmacological correction: abstracts of reports of the II scientific and practical Internet-conference with international participation; 2019 November 21; Kharkiv, Ukraine]. NFaU; 2019. p. 238. Ukrainian. 12. National Research Council (US) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Veterinary care [Internet]. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. 8th edition. U.S. National Academies Press; 2011 [cited 2021 Sept 8]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK54052/ 13. Zorenko YM, Pavlova OO, Gorbach TV, Martynova SM. [The role of hypoxia and mitochon- drial dysfunction in the mechanisms of development of experimental dementia of Alzheimer's type of different genesis in rats, evaluation of the possibility of correction of this condition by mesenchymal stem cells]. Bulletin of problems of biology and medicine. 2021;1(159):66-72. Ukrainian. 14. Zorenko YM, Prokhorenkova ZO. [Dynam- ics of the state of the prooxidant-antioxidant system and the brain of rats with nitrite-induced dementia of the Alzheimer's type on the background of the intro- duction of mesenzymal stem cells]. In: [Current is- sues of modern medicine: abstracts of the XVIII International Scientific Conference of students, young scientists and professionals. 2021 April 22- 23; Kharkiv, Ukraine]. KhNU im.V.N. Karazina; 2021. p.76-77. Ukrainian. 15. Lesuis SL, Maurin H, Borghgraef P, Lu- cassen PJ, Van Leuven F, Krugers HJ. Positive and negative early life experiences differentially modu- late long term survival and amyloid protein levels in a mouse model of Alzheimer's disease. Oncotarget. 2016;7(26):39118-39135. DOI: 10.18632/oncotarget.9776. PMID: 27259247; PMCID: PMC5129918. Губіна-Вакулик Г.І., Денисенко С.О., Горбач Т.В., Зоренко Є.М., Гойдіна В.С. Морфофункціо- нальний стан мозкової речовини і пучкової зони кори надниркових залоз при моделюванні хворо- би Альцгеймера надлишковим введенням нітриту натрію. РЕФЕРАТ. Актуальність. Нітрати і нітрити присутні в ґрунті, воді, продуктах харчування людини, барвниках і ліках. У літературі розглядаються як позитивні, так і негативні ефекти від попадання нітратів і нітритів в організм. У роботі була використана нітритна модель деменції Альцгеймера судинного по- ходження. Мета дослідження - вивчити морфофункціональний стан надниркових залоз експерименталь- них тварин при тривалому введенні нітриту натрію. Дослідження проведено на щурах-самцях популяції WAG, які були розділені на 3 групи: гр. N-14 - отримували ін'єкції водного розчину нітриту натрію в дозі 50 мг / кг маси тіла щодня протягом 14 днів; гр. N-28 - щури отримували аналогічні ін'єкції протягом 28 днів. Ін'єкції - внутрішньочеревні. Контрольним щурам вводили 0,9% розчин натрію хлориду. Результа- ти. У тварин основних груп має місце формування морфофункціональної картини розвитку стресової реакції, що підтверджено також морфометрично, також в групі N-28 - з ознаками початкової декомпен- сації мозкового речовини і пучкової зони кори надниркових залоз. Висновок. При моделюванні хвороби Альцгеймера у лабораторних щурів введенням водного розчину нітриту натрію в дозі 50 мг / кг маси тіла щодобового внутрішньочеревневою ін'єкцією протягом 14 і 28 днів в мозковій речовині і пучковій зоні кори надниркових залоз формується картина їх морфофункціональної активації. У групі з 28-денним курсом введення розчину нітриту натрію з'являються морфофункціональні ознаки декомпенсації мозко- вої речовини і пучкової зони наднирникових залоз (особливо виражено – у мозковій речовині), що свід- чить про розвиток у тварин важкого дистресу і неможливості відновлення гомеостазу. Ключові слова: хвороба Альцгеймера, нітрит натрію, наднирникові залози, щури. Губина-Вакулик Г.И., Денисенко С.А., Горбач Т.В., Зоренко Е.М., Гойдина В.С. Морфофунк- циональное состояние мозгового вещества и пучковой зоны коры надпочечников при моделиро- вании болезни Альцгеймера избыточным введением нитрита натрия. РЕФЕРАТ. Актуальность. Нитраты и нитриты присутствуют в почве, воде, продуктах питания че- ловека, красителях и лекарствах. В литературе рассматриваются как положительные, так и отрицатель- ные эффекты от попадания нитратов и нитритов в организм. В работе была использована нитритная мо- дель деменции альцгеймеровского типа сосудистого происхождения. Цель исследования – изучить мор- фофункциональное состояние надпочечников экспериментальных животных при длительном введении нитрита натрия. Исследование проведено на крысах-самцах популяции WAG, которые были разделены на 3 группы: гр. N-14 – получали инъекции водного раствора нитрита натрия в дозе 50 мг/кг массы тела __________________________________________________________________________________ MORPHOLOGIA • 2021 • Том 15 • № 3 83 ежедневно в течение 14 дней; гр. N-28 – крысы получали аналогичные инъекции в течение 28 дней. Инъ- екции – внутрибрюшинные. Контрольным крысам вводили 0,9% раствор натрия хлорида. Результаты. У животных основных групп имеет место формирование морфофункциональной картины развития стрес- совой реакции, что подтверждено также морфометрически, причем в группе N-28 – с признаками начи- нающейся декомпенсации мозгового вещества и пучковой зоны коры надпочечников. Заключение. При моделировании болезни Альцгеймера у лабораторных крыс введением водного раствора нитрита натрия в дозе 50 мг/кг массы тела ежесуточной внутрибрюшинной инъекцией в течение 14 и 28 дней в мозговом веществе и пучковой зоне коры надпочечников формируется картина их морфофункциональной актива- ции. В группе с 28-дневным курсом введения раствора нитрита натрия появляются морфофункциональ- ные признаки декомпенсации мозгового вещества и пучковой зоны надпочечников, (особенно выражен- но – мозговое вещество), что свидетельствует о развитии у животных тяжелого дистресса и невозможно- сти восстановления гомеостаза. Ключевые слова: Болезнь Альцгеймера, нитрит натрия, надпочечники, крысы.