260 ISSN 2219-3782. Ôàêòîðè åêñïåðèìåíòàëüíî¿ åâîëþö³¿ îðãàí³çì³â. 2015. Òîì 16 © ФЕДОТА А. М., РОЩЕНЮК Л. В., АДМАКИНА А. В., СОЛОДЯНКИН А. С. Метилентетрагидрофолатредуктаза (MTHFR, Methylenetetrahydrofolate reductase, 1p36.3, OMIM 607093) расположена в локусе р36.3 длинного плеча 1-й хромосомы. MTHFR играет ключевую роль в метаболизме фолиевой кислоты. Наиболее изученными SNP гена MTHFR являются однону- клеотидные полиморфизмы С677Т и А1298С. У гомозигот по полиморфному аллелю Т в пози- ции 677 гена MTHFR отмечается термолабиль- ность фермента и снижение его активности до 70 % от среднего значения, полиморфный вари- ант С в позиции 1298 в гомозиготном состоянии снижает активность MTHFR до 60 %, что приво- дит не только к нарушению метаболизма фолатов и процессов метилирования в клетке, но и избы- точному накоплению гомоцистеина в плазме крови [5, 12–13, 16]. У дигетерозигот отмечается депрессия функции фермента [5]. В настоящее время известно, что гипергомоцистеинемия яв- ляется фактором риска развития ишемической болезни сердца, инфаркта миокарда, атероскле- роза, атеротромбоза, осложнений беременности [7, 17], приводящих к врожденным порокам раз- вития [11], предраковых и раковых состояний колоректальной области [14–15]. Поскольку комбинации генотипов по полиморфным вари- антам позиций 677 и 1298 гена MTHFR могут приводить к снижению активности фермента и гипергомоцистеинемии в различной степени, представляется актуальным проанализировать распределение генотипов по рассматриваемым SNP у больных псориазом [2–4]. Материалы и методы Материалом для исследования послужили образцы периферической крови 201 больного с различными формами псориаза, находящегося на диспансерном учете в ХОККВД № 1. От всех участников исследования или их родственни- ков было получено информированное согласие УДК 575. 164 ФЕДОТА А. М.1, РОЩЕНЮК Л. В.2, АДМАКИНА А. В.1, СОЛОДЯНКИН А. С.3 1 Харьковский национальный университет имени В.Н. Каразина МОН Украины, Украина, 61077, г. Харьков, пл. Свободы, 4, e-mail: afedota@mail.ru 2 Харьковский областной клинический кожно-венерологический диспансер № 1, Украина, 61000, г. Харьков, ул. Карла Маркса, 17, e-mail: okkvd1@gmail.com 3 ННЦ Институт экспериментальной и клинической ветеринарной медицины, Украина,61023, г. Харьков, ул. Пушкинская, 83, e-mail: alex_solod@mail.ru АНАЛИЗ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ С677Т И А1298С ГЕНА MTHFR У БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ на участие в данной работе. Выделение ДНК проводилось с помощью наборов для экстрак- ции «ДНК Diatom DNA Prep 100» («Isogene Lab. Ltd.». Для полиморфного варианта С677Т реак- ция амплификации проведена с использованием наборов «GenPak MTHFR PCR test» («Isogene Lab.Ltd») на термоциклере BIOMETRA T3000 по стандартной методике. Генотипирование поли- морфизма А1298С проводилось методом ПДРФ, с использованием однонуклеотидных праймеров [8] и эндонуклеазы рестрикции MboII. Элек- трофоретический анализ проведен с помощью наборов для электрофореза производителя «Ам- плиСенс» в 2 % и 3 % агарозном геле. Маркером молекулярной массы служила ДНК Ladder M50. Оценка равенства рядов распределения про- ведена с помощью критерия χ2 на уровне значи- мости 0,05 и 0,001 [1]. Результаты и обсуждение Анализ полиморфных вариантов гена MTHFR как возможных предикторов для разви- тия псориаза показал, что частоты аллелей поли- морфизмов C677T и A1298C у больных псориа- зом составили: Р С = 0,719, P Т = 0,281 и P А = 0,667, P С = 0,333, соответственно. На основании частот анализируемых алелей получено теоретическое число генотипов для панмиксной популяции. Структура популяции соответствует соот- ношению Харди-Вайнберга, фактическое рас- пределение генотипов статистически значимо не отличается от теоретически ожидаемого при рав- новесии (табл. 1, 2) для полиморфных вариантов С677Т (df = 2, χ2ст = 5,99, χ2ф = 3,04, p > 0,05) и А1298С (df = 2, χ2ст = 5,99, χ2ф = 3,54, p > 0,05) гена MTHFR. При условии, что полиморфные аллели ис- следуемых позиций внутри одного гена не яв- ляются сцепленными, следует ожидать, что ана- ISSN 2219-3782. Ôàêòîðè åêñïåðèìåíòàëüíî¿ åâîëþö³¿ îðãàí³çì³â. 2015. Òîì 16 261 Àíàëèç ïîëèìîðôíûõ âàðèàíòîâ Ñ677Ò è À1298Ñ ãåíà MTHFR ó áîëüíûõ ïñîðèàçîì лизируемая выборка будет равновесной по всем независимым комбинациям. Анализ рядов распределения генотипов боль- ных по полиморфизмам С677Т и А1298С показал статистически значимую разницу между теоре- тически ожидаемыми частотами и фактическими (df = 8, χ2ст = 44,0, χ2ф = 26,12, р < 0,001) (табл. 3). Подобные отклонения от равновесия могут означать, что носители одних генотипов, веро- ятно, обладают селективным преимуществом, других, например ТТСС, ТТАС, — пониженной адаптивностью, и их отсутствие может быть обу- словлено действием отбора. Например, исследо- вателями показано [10], что хотя полиморфные варианты гена MTHFR вносят вклад в развитие кардиоваскулярной патологии, являются фак- тором риска развития артериальной гипертен- зии, участвуют в патогенезе левожелудочковой систолической дисфункции (LVSI), гетерозиготы по обеим аллелям СТ АС менее склонны к раз- витию этой патологии, и авторы заключают, что протективность этого генотипа может являться примером молекулярного гетерозиса. Полученная информация о частотах алле- лей и генотипов по исследуемому гену может быть использована для анализа структуры по- пуляции и процессов, которые в ней происхо- дят, поскольку в различных популяциях, этни- ческих группах и климатогеографических зонах эти параметры неодинаковы. Среди некоторых групп населения и в разных этнических груп- пах генотипы [9], влияющие на обмен гомоци- стеина, могут встречаться с частотой до 20 %, поскольку нарушения метаболизма могут кор- ректироваться пищевыми фолатами. Супрессия доступности фолиевой кислоты, наблюдаемая при курении, может еще больше усилить вклад отдельных генотипов по полиморфным вариан- там гена MTHFR в развитие гипергомоцистеине- мии [5], что важно учесть при работе с больными псориазом. Вывод Генетический анализ полиморфных вариан- тов С677Т и А1298С гена MTHFR, являющихся факторами риска развития нарушений с широ- ким спектром клинических симптомов, показал актуальность их исследования у больных псо- риазом, что будет продолжено в следующих ра- ботах. Таблица 1 Распределение генотипов СС, СТ, ТТ по полиморфному варианту С677Т гена MTHFR у больных псориазом Распределение ТТ СТ СС кол-во % кол-во % кол-во % Фактическое 11 5,5 91 45,3 99 49,3 Теоретическое 8 7,9 98 40,4 95 51,7 Таблица 2 Распределение генотипов АА, АС, СС по полиморфному варианту А1298С гена MTHFR у больных псориазом Распределение АА АС СС кол-во % кол-во % кол-во % Фактическое 43 43 47 47 9 10 Теоретическое 48 38 44 56 7 6 Таблица 3 Частоты генотипов по полиморфным вариантам С677Т и А1298С гена MTHFR у больных псориазом Генотип Частота генотипа Количество наблюдений Статистики теоретически фактически ТТ СС ТТ АС ТТ АА СТ СС СТ АС СТ АА СС СС СС АС СС АА 0,002 0,003 0,095 0,032 0,316 0,200 0,053 0,168 0,147 6 12 6 12 24 12 6 12 6 0 0 9 3 30 19 5 16 14 df = 8, χ2ст = 26,12, χ2ф = 44,0 р < 0,001 262 ISSN 2219-3782. Ôàêòîðè åêñïåðèìåíòàëüíî¿ åâîëþö³¿ îðãàí³çì³â. 2015. Òîì 16 Ôåäîòà À. Ì., Ðîùåíþê Ë. Â., Àäìàêèíà À. Â., Ñîëîäÿíêèí À. Ñ. ЛИТЕРАТУРА 1. Атраментова Л. О., Утєвська О. М. Статистичні методи в біології. — Харків, 2007. — 288 с. 2. Генетический паспорт — основа индивидуальной и предиктивной медицины / Под ред. В. С. Баранова. — СПб: Изд-во Н-Л, 2009. — 528 с. 3. Горовенко Н. Г., Ольхович Н. В., Россоха З. І., Пічкур Н. О., Кир’яченко С. П. Вплив поліморфізму С677Т гена MTHFR на фолатний статус та рівень гомоцистеїну в сироватці крові у дітей з когнітивними розладами // Актуальні проблеми акушерства і гінекології, клінічної імунології та медичної генетики. — К. — Луганськ, 2010. — С. 61–70. 4. Гречанина Е. Я., Гусар В. А. Распространенность полиморфизмов С677Т MTHFR и A66G MTRR генов системы фолатного цикла в популяциях восточной Украины // Актуальні проблеми акушерства і гінекології, клінічної імунології та медичної генетики. — К. — Луганськ, 2010. — С. 91–97. 5. Родзинский В. Е., Иткес А. В., Галина Т. В., Карпова Е. В., Хотайт Г. Я. Мяндина Г. И. Корреляция различных форм гестоза с генотипом по гену GPIIIα β-цепи интегрина // Акушерство и гинекология. — 2001. — № 6. — С. 53–57. 6. Рыжко П. П., Федота A. M., Воронцов В. М. Генодерматозы: буллёзный эпидермолиз, ихтиоз, псориаз. — Харь- ков: Фолио, 2004. — 334 с. 7. Чорна Л. Б., Макух Г. В., Акопян Г. Р., Заставна Д. В., Прокопчук Н. М. Аналіз поліморфних варіантів генів MTHFR, MTR, MTRR та мутацій генів FV // Вісник Харківського національного університету імені В. Н. Ка- разіна. — 2011. — Вип. 13, № 947. — С. 118–124. 8. Armitage P., Berry G. Statistical methods in medical research. 3rd ed. — Blackwell Scientifi c Publications, 1994. — 620 р. 9. Bagheri M., Rad I. A., Omrani M. D., Nanbaksh F. С677Т MTHFR and А1298С Mutations in the Methylente- trahydrofolate Reductase Gene in Patients with Recurrent Abortion from the Iranian Azeri Turkish // In. J. of Fert. And Ster. — 2010. — N 3. — P. 134–139. 10. Strauss E., Supinski W, Gluszek J. Pawlak A. L. Compound heterozygosity of MTHFR (677Ct/1298Ac) protects, both normotensive and hypertensive males with cad, against the left ventricular systolic heart insuffi ciency // J. Hypertension. — 2010. — 28. — P. 344. 11. Doolin M.-T., Barbaux S., McDonnell M., Hoess K., Whitehead A. S., Mitchell L. E. Maternal genetic effects, exerted by genes involved in homocysteine remethylation, infl uence the risk of spina bifi da // Am. J. Hum. Genet. — 2002. — N 71. — P. 1222–1226. 12. Ioannidis J. P., Ntzani E. E., Trikalinos T. A. ‘Racial’ differences in genetic effects for complex diseases // Nat. Genet. — 2004. — N 36 (12). — P. 1243–1244. 13. Guttormsen A. B., Ueland P. M., Nesthus I., Nygard D., Schneede J., Vollse S. E., Refsum H. Determinants and vitamin responsiveness of intermediate hyperhomocysteinemia (>or = 40 micromol/liter). The Hordaland Homocysteine Study // J. Clin. Invest. — 1996. — N 98 (9). — P. 2174–2183. 14. Martin D. N., Boersma B. J., Howe T. M., Goodman J. E. Association of MTHFR gene polymorphisms with breast cancer survival BMC // Cancer. — 2006. — № 6. — P. 257. 15. Sazci A., Ergul E., Bayulkem K. Association of the C677T and A1298C polymorphisms of methylentetrahydrofolat reductase gene in patients with essencial tremor in Turkey // Mov. Disord. — 2004. — 19. — P. 1472–1476. 16. Tatarskyy P., Kucherenko A., Livshits L. Allelic polymorphism of F2, F5 and MTHFR genes in population of Ukrain // Cytology and genetics. — 2010. — 44. — N 3. — P. 129–133. 17. Zetterberg H., Regland B., Palmér M., Ricksten A. Increased frequency of combined methylenetetrahydrofolate reductase C677T and A1298C mutated alleles in spontaneously aborted embryos // Eur. J. Hum. Genet. — 2002. — N 10 (10). — P. 578–579. ISSN 2219-3782. Ôàêòîðè åêñïåðèìåíòàëüíî¿ åâîëþö³¿ îðãàí³çì³â. 2015. Òîì 16 263 Àíàëèç ïîëèìîðôíûõ âàðèàíòîâ Ñ677Ò è À1298Ñ ãåíà MTHFR ó áîëüíûõ ïñîðèàçîì FEDOTA A.M.1, RASCHELYUK L.B.2, ADMAKINA A.B.1, SOLODYANKIN A.S.3 1 V.N. Karazina Kharkiv National University, Ukraine, 61022, Kharkiv, Svoboda str., 4, e-mail: afedota@mail.ru 2 Kharkiv regional clinical skin and venereal diseases dispensary № 1, Ukraine, 61000, Kharkiv, Karl Marx str., 17, e-mail: okkvd1@gmail.com 3 National Scientifi c Centre «Institute an experimental and clinical of veterinary medicine», Ukraine, 61023, Kharkiv, Pushkinska str., 83, e-mail: alex_solod@mail.ru ANALYSIS OF POLYMORPHIC VARIANTS С677Т AND A1298C OF MTHFR GENE IN PATIENTS WITH PSORIASIS Aim. Analysis of DNA samples for the study of psoriasis patients SNP C677T and A1298C gene methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR). Methods. Genealogical analysis of 201 probands and relatives was carried out. Genomic DNA of 201 patients was analyzed by polymerase chain reaction. Testing statistical hypotheses about the association studied genotypes with disease and evaluation of equality of distribution series conducted using χ2 test at a signifi cance level of 0.05, 0.01 and 0.001. Results. Population structure corresponds to the correlation of the Hardy-Weinberg balance, the actual distribution of genotypes was not signifi cantly different from the theoretically expected at balance C677T polymorphisms (df = 2, st = 5.99, f = 3.04, p > 0,05) and A1298C (df = 2, st = 5.99, f = 3.54, p > 0.05). Analysis of the distribution series genotype frequencies for polymorphisms C677T and A1298C MTHFR gene in patients showed a statistically signifi cant difference between the theoretically expected and actual frequencies (F = 44.0, p < 0.001). Conclusion. The sample of patients with psoriasis shows deviations from balance by combinations of genotypes that are analyzed in the positions of the C677T and A1298 gene MTHFR. Such deviation from balance may mean that some genotypes carriers probably have a selective advantage, others — low adaptability. Keywords: psoriasis, folic acid, homocysteine, methylenetetrahydrofolate reductase.