УДК 616.314.18-002.4-071-092-056.7
Е.Н. Рябоконь, В.В.Олейничук 

ПРООКСИДАНТНО - АНТИОКСИДАНТНЫЙ СТАТУС У БОЛЬНЫХ ПАРОДОНТИТОМ С ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ АССОЦИИРОВАННОЙ С ИНФЕКЦИЕЙ H.PILORY

Харьковский национальный медицинский университет

	ПРООКСИДАНТНО - АНТИОКСИДАНТНЫЙ СТАТУС У БОЛЬНЫХ ПАРОДОНТИТОМ С ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ АССОЦИИРОВАННОЙ С ИНФЕКЦИЕЙ H.PILORY
Проведено порівняльне дослідження прооксидантно оксидантного статусу у хворих пародонтитом на тлі виразкової хвороби шлунку та дванадцятипалої кишки асоційованої з інфекцією H.Pylory Встановлено зниження потенціалу адаптаційних механізмів , що виражається у поступовому розвитку напруги , виснаження та зриву систем антиоксидантного захисту, та паралельному наростанні концентрації продуктів перекисного окислення ліпідів. Дослідження та оцінка стану ферментативної ланки антиоксидантної системи на такому матеріалі як ротова рідина дозволяє отримувати данні про походження та формування механізму реакцій, які мають місце при розвитку пародонти ту.
Ключові слова:Виразкова хвороба шлунку, пародонтит, Н. pylori, антиоксиданти. 
Харківський національний медичний університет (м.Харків)

Ключевые слова
Язвенная болезнь желудка, пародонтит, Н. pylori, антиоксиданты. 
Резюме
Проведено сравнительное исследование прооксидантно оксидантного статуса у больных пародонтитом на фоне язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки асоциированной с инфекцией H.Pylory Установлено снижение потенциала адаптационных механизмов, который выражается в постепенном развитии напряжения, истощения и срыва систем антиоксидантной защиты и параллельном нарастании концентрации продуктов перекисного окисления липидов. Исследование и оценка состояния ферментативного звена антиоксидантной системы на таком материале как ротовая жидкость позволяет получать данные о происхождении и формировании механизмов биохимических  реакций, которые имеют место при развитии пародонтита

Keywords
Ulcerous illness of stomach, parodonti, Н. of pylori, antioxidants. 
Resume
Comparative research of прооксидантно of оксидантного status is conducted for the patients of пародонтитом on a background ulcerous illness of stomach and duodenum of H associated with an infection.The decline of potential of adaptation mechanisms, which is expressed in gradual development of tension, exhaustion and blowing off the systems of oxidization defence, is Set Pylory but parallel growth of concentration of foods of peroxide of oxidization of lipids. Research and estimation of the state of ферментативної link of the antioxidants  system on such material as a mouth liquid allows to get данні about an origin and forming of mechanism of reactions which take place at development of parodonti  

Воспалительные заболевания пародонта по своей распространенности и медико-социальной значимости занимают важное место в структуре стоматологической патологии [1] . Подтверждено, что они тесно связаны с развитием эрозивно-язвенных процессов в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки. Причем, среди этиологических факторов этих заболеваний особое внимание в настоящее время уделяется Н. pylori, как возбудителю, являющемуся в 96-100% случаев ее причиной [2]. 
В тоже время существенное значение в патогенезе пародонтита занимает увеличение интенсивности свободнорадикального окисления (СРО), являющегося  универсальной ответной реакцией клеточных мембран на патологические агенты. Аномальная активация перекисного окисления липидов (ПОЛ), вызванная образованием избытка свободных радикалов (СР), формирующимся в результате нарушения метаболизма в тканях пародонта, является начальным этапом молекулярных нарушений, приводящих к развитию так называемой «свободнорадикальной патологии». По существующим в настоящее время представлениям, при активации ПОЛ происходит нарушение функционирования мембраносвязанных ферментов, включающее в себя действие токсических продуктов распада, а также повреждение  структуры мембраны в результате изменения физико-химических свойств мембранных фосфофлипидов [3]. То есть, исследование особенностей функционирования прооксидантно-антиоксидантной системы, с одной стороны, позволяет получить информацию об особенностях патогенеза пародонтита за счет определения места СРО в данном процессе. С другой стороны, данная информация весьма ценна с позиций лечения и профилактики, так как открывает перед врачем-стоматологом достаточно широкие перспективы относительно использования веществ, обладающих антиоксидантной  активностью (АО), в комплексной терапии данного заболевания.
 Целью настоящей работы послужило сравнительное исследование прооксидантно - антиоксидантного статуса у больных пародонтитом, с гастродуоденальной патологией ассоциированной с инфекцией H.Pylory. 
Материалы и методы. В обследовании участвовали лица, обоего пола в возрасте 40-45 лет, которые были разделены на 2 группы: основную и контрольную. В основную группу вошли лица с гастродуоденальной патологией ассоциированной с инфекцией H.Pylory; контрольную группу составили больные хроническим генерализованным пародонтитом без соматической патологии. Разница в показателях у мужчин и женщин была статистически не достоверной, поэтому мы ее не учитывали при формировании групп. В зависимости от тяжести генерализованного пародонтита (ГП) обследуемые в каждой группе были разделены на 3 подгруппы соответственно. Данные распределения обследованных представлены в таблице 1.
Таблица 1
Характеристика групп пациентов
Основная группа	Количество
человек	Контрольная группа	Количество
человек	
1-я подгруппа
ГП 1 степени	28	1-я подгруппа
ГП 1-й ст.	10	
2-я подгруппа
ГП 2 степени	37	2-я подгруппа
ГП 2-й ст.	10	
3-я подгруппа
ГП 3 степени	25	3-.я подгруппа
ГП 3-й ст	9	

Содержание диеновых конъюгатов в ротовой жидкости определяли спектрофотометрическим методом. Содержание малонового диальдегида (МДА) в ротовой жидкости определяли флюорометрическим методом. Принцип метода основан на способности конечного продукта окисления липидов МДА образовывать с ТБК флуоресцирующий комплекс (в кислой среде, при высокой температуре). Длина волны возбуждения 490 нм, эмиссии – 520 нм.Активность каталазы определяли спектрофотометрическим методом по скорости утилизации Н2О2 из инкубационной среды в цветной реакции с молибдатом аммония. Определение активности пероксидазы ротовой жидкости проводили с использованием субстрата п-фенилендиамина    по скорости реакции окисления хромогенного субстрата (п-фенилендиамина) перекисью водорода. Количество восстановленного глютатиона (G-SH) в ротовой жидкости проводили спектрофотометрическим методом с реактивом Эллмана. Принцип метода основан на применении специфичного тиолового реагента - 5,5-дитиобиснитробензойнои кислоты (ДТНБ - реактив Эллмана), которая в реакции тиолдисульфидного обмена легко восстанавливается SH – веществами, образуя окрашенный в желтый цвет продукт ТНБ (тионитробензоат, Дmах = 412 нм) [4].
В качестве объекта исследования использовалась ротовая жидкость [4,5], для постановки диагноза заболеваний пародонта была использована классификация Н.Ф.Данилевского (1994) [6].
Результаты исследования.
Полученные данные исследования свидетельствуют о повышении интенсивности процессов ПОЛ в ротовой жидкости больных 1-3 групп. Это позволяет говорить о существенном утяжелении состояния больных, нарушении процессов окислительного фосфорилирования, приводящем к постепенной дестабилизации клеточных мембран, выходу прооксидантно – антиоксидантной системы из нормального для нее состояния подвижного равновесия. Наибольшая выраженность установлена применительно к диеновым конъюгатам,  являющимся промежуточными продуктами ПОЛ. По мере отягощения состояния больных, выражающегося в генерализации и увеличении выраженности пародонтита, происходит параллельное увеличение концентрации промежуточных продуктов ПОЛ, причем установлена достоверность не только по отношению к контрольной группе, но и в сравнении 1-3 групп, (p<0,05).Что касается конечного продукта ПОЛ – малонового диальдегида, то достоверные отличия установлены между 3 и 4 группами (p<0,05), то есть группой больных с максимальной выраженностью поражения пародонта и контролем. На наш взгляд, это иллюстрирует процесс максимального нарушения прооксидантно-антиоксидантного статуса больных с генерализованным пародонтитом 3 степени, связанного с воспалительными изменениями пародонта. С другой стороны, полученные данные позволяют предполагать определенную обратимость процесса, происходящего в пародонте больных 1 и 2 групп, подтверждаемую отсутствием значимых изменений. Это, в свою очередь, достаточно важно для организации комплексной терапии и прогноза состояния больных данной нозологии.
Оценка АО-ного статуса производилась по состоянию ферментативного звена АО-й системы – активности каталазы, концентрации SH-групп и восстановленного глутатиона. Данные показатели адекватно отражают потенциал водорастворимых антиоксидантов, что имеет существенное значение при оценке состояния полости рта. Кроме того, их использование позволяет получить информацию об основных компонентах ферментативной АОС, действующих в водной среде, – каталазе и системе глутатитонпероксидаза – глутатионредуктаза (ГП - ГР), эффективность которой оценивается по двум последним показателям. Выбор именно их обусловлен биологической ролью данных ферментов. Так, каталаза непосредственно разрушает перекись водорода, а в системе ГП – ГР первое звено разрушает радикалы, а второе – восстанавливает редокс-потенциал первого. Полученные результаты приведены в таблице 2.3  

Таблица 2  
Состояние прооксиднтно - антиоксидантного статуса больных генерализованным пародонтитом основной группы
Показатель	Группы	
	1 подгруппа	2 подгруппа	3 подгруппа	
Диеновые конъюгаты, мкмоль/л	28,37 ±2,122,3,4	36,34 ±1,293,4	40,55±1,244	
Малоновый диальдегид, мкмоль/л	3,01 ±1,23	3,28 ±1,13	4,81±0,844	
Активность каталазы, мккатал/л	1,84 ±0,213	1,46 ±0,98	1,02±0,054	
SH-группы, ммоль/л	0,66 ±0,13	0,55 ±0,11	0,53±0,024	
Восстановленный глутатион, ммоль/л	0,96± 0,21	0,78 ±0,094	0,63±0,034	
Примечание: индекс обозначает, с какой группой различия достоверны p<0,05).

Таблица3
Состяние прооксидантно-антиоксидантного статуса у больных хроническим генерализованным пародонтитом контрольной группы
                                   
Показатель	Группы	
	1 подгруппа	2 подгруппа	3 подгруппа	
Диеновые коньюгаты, мкмоль/л	
20,12± 2,12	
21,88 ±1,83	
27,17± 2,43	
Малоновый диальдегид, мкмоль/л	
2,16± 0,53	
2,50± 0,47	
3,89± 0,61	
Активность каталазы, мккатал/л	
2,70± 0,26	
2,33± 0,31	
1,80± 0,2	

SH-группы, моль/л	
1,11± 0,23	
0,77± 0,18	
0,33± 0,09	
Восстановленный глутатион, моль/л	
1,43± 0,22	
1,18± 0,17	
0,67± 0,09	

Примечание: индекс обозначает, с какой группой различия достоверны p<0,05).
Установленные у больных изменения характеризовались одинаковой направленностью, выявлено падение активности каталазы, снижение концентрации восстановленного глутатиона и SH-групп. Полученные результаты позволяют утверждать, что в 3 группе больных с максимальной выраженностью генерализованного пародонтита имеет место напряжение, истощение и срыв защитных антиоксидантных механизмов, проявляющийся достоверным снижением всех указанных показателей сравнительно с группой контроля. Интересен тот факт, что активность каталазы в 1 группе была достоверно выше, чем в 3 группе, а вот отличия с группой контроля были недостоверны. То есть, у лиц с генерализованным пародонтитом 1 степени состояние защитных АО-ных систем характеризуется напряжением, позволяющим в определенной степени лимитировать уровень ПОЛ. В зависимости от развития ситуации (отягощение состояния или, наоборот, оптимизация, обусловленная комплексной терапией) практически одинаково вероятны как переход ко 2 степени генерализации, так и возврат к стабилизации процесса. Приведенные данные позволяют считать активность каталазы достаточно информативным прогностическим признаком, позволяющим в определенной степени дифференцировать нарушения гомеостаза, возникающие по мере отягощения состояния пародонта. А, учитывая, доступность, простоту и эффективность методики его определения, возможно использование данного фермента в качестве скрининга состояния больных с генерализованным пародонтитом различной степени выраженности.
Аналогичная зависимость установлена и для восстановленного глутатиона, когда по мере роста выраженности пародонтита происходит снижение его концентрации, причем наиболее значимое у больных со 2 и 3 степенями генерализованного пародонтита. Концентрация SH-групп в 3 группе была достоверно снижена сравнительно с контролем, что иллюстрирует существенное уменьшение резервных возможностей больных с максимальной выраженностью пародонтита, что, в свою очередь, приводит к нарушению функционирования одной из основных ферментных систем разрушения перекисей - системы глутатионпероксидаза – глутатионредуктаза. Это дает основания предполагать нарушение нормального разложения гидроперекисей в качестве одного из факторов, отягощающих состояния пародонта, и вызывающих постепенное усугубление статуса больных.
Выводы
Таким образом, происходящие изменения характеризуют разнонаправленные, но взаимообусловленные сдвиги в обоих звеньях прооксидантно – антиоксидантной системы, иллюстрирующие выраженный сдвиг равновесия. Увеличение концентрации продуктов ПОЛ, отражающее рост интенсивности СРО, способствует более быстрому истощению запасов биоантиоксидантов и падению редокс - потенциала системы. Причем в данном случае формируется своеобразный «порочный круг», когда уже каждая предыдущая стадия запускает последующую, а вероятность обратимости и нормализации состояния постепенно снижается до минимума. В связи с этим, представляет интерес рассмотрение в сравнительном аспекте результатов, полученных в обследованных группах. Результаты однозначно подтверждают, что генерализация и рост выраженности пародонтита способствуют постепенному израсходованию физиологических запасов биоантиоксидантов, особенно выраженному применительно к водорастворимым веществам, используемым, прежде всего, местно в полости рта для лимитирования процесса воспаления пародонта. 
Отсутствие достоверных изменений по некоторым показателям позволяет предположить, что в случае пародонтита 1 и 2 степени тяжести емкость физиологических защитных (в данном контексте АО) механизмов  достаточна для регуляции процесса ПОЛ. По мере перехода от 2 к 3 степени происходит своеобразный «качественный скачок», когда резервная мощность АО-ных систем оказывается недостаточной для компенсации усилившегося процесса ПОЛ, соотношение стимулов изменяется в пользу прооксидантных агентов и окислительная деструкция вносит свой вклад в развивающийся патологический процесс в пародонте. Нарушение гомеостаза проявляется истощением и срывом работы как антиоксидантов прямого действия, непосредственно элиминирующих свободные радикалы, так и ферментных систем, обладающих как прямым, так и непрямым эффектом. Результаты, приведенные в данном разделе, отражают изменения, происходящие в прооксидантно – антиоксидантном статусе, лиц, страдающих пародонтитом, ассоциированным с гастродуоденальной патологией. С определенной уверенностью можно утверждать, что нарушение равновесия между свободнорадикальным окислением и АОС является одним из ключевых звеньев развития пародонтита. В качестве своеобразных регуляторов патогенеза выступают вещества, обладающие АО-ной активностью.  Установленное снижение потенциала адаптационных механизмов выражается в постепенном развитии напряжения, истощения и срыва систем АО защиты и параллельном возрастании концентрации продуктов ПОЛ. Это дает основания говорить об определенном параллелизме между тяжестью нарушений пародонта и состоянием системы ПОЛ – АОС. 
Полученные результаты позволяют утверждать, что данные по оценке активности процессов АО защиты и ПОЛ, степени смещения равновесия между прооксидантами и антиоксидантами в биологических субстратах можно рассматривать как объективные и очень чувствительные показатели общего состояния организма, активности и совершенства функционирования систем регуляции и поддержания устойчивого состояния гомеостаза.
Перспективы дальнейших исследований 
Исследование и оценка состояния ферментативного звена АО-ной системы на таком доступном и целесообразном объекте как ротовая жидкость позволяет получить данные о природе и механизме реакций, происходящих в процессе развития пародонтита, что может быть использовано как для диагностики, так и с целью прогнозирования. Изучение динамики активности каталазы у больных с пародонтитом различной степени выраженности позволяет рекомендовать данную методику в качестве скрининга при оценке и прогнозе состояния. Кроме того, полученные данные исследования дают основания рекомендовать использование антиоксидантов в комплексной терапии пародонтита в виде местного или общего лечения. Перспективным путем применения должно быть признано повышение антиоксидантного потенциала рациона больных, так как данный метод не только наиболее физиологичен, но и доступен и экономически целесообразен.
Список литературы.

1.	Цепов Л.М., Николаев А.И. Нерешенные вопросы этиологии и патогенеза воспалительных заболеваний пародонта. // Пародонтология. -2001. -№1-2. –С. 28-31.
2.	Робакидзе Н.С., Цимбалистов А.В., Дубова М.А. Развитие гастродуоденальной патологии у больных, инфицированных Helicobacterpylori, в стоматологическом аспекте // Вестн. С.-Петерб. ун-та. - Сер. 11. - 2006. - Вып. 1. - С. 110-116.
3.	Губский Ю.И. Коррекция химического поражения печени– К.:Здоровья,1989.-168 с.
4.	Практикум по боихимии /Под ред.С.Е. Северина, Т.А. Соловьевой.- М.:Изд-во МГУ, 1989.-С.160-161.
5.	Кочетов Т.А. Практическое руководство по энзимологии.-М., 1980.- с.217.
6.	Данилевский Н.Ф., Борисенко А.В. Заболевания пародонта.- К.: Здоров'я, 2000. - 461с.